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小鼠ELISA试剂盒在实验前要做好哪些准备工作?

发布时间: 2022-03-29  点击次数: 241次
  小鼠elisa试剂盒是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
 
  小鼠ELISA试剂盒的实验原理:                                     
  将目标抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的抗体结合,然后加入微生物化的目标抗体,将未结合的生物素抗体洗净后,加入HRP标记和亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。
 
  实验前的准备工作:
  1、准备好所有实验额外所需物品,如试管 吸头 移液器 离心机等;
  2、确定试剂盒在有效期内;
  3、仔细阅读说明书;
  4、按说明书确定所有试剂齐全(数量 体积);
  5、标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份;
  6、根据检测标本数量确定所需试剂的量;
  7、按说明书将所用试剂盒平衡至室温,配制所需试剂。
 
  小鼠ELISA试剂盒的洗板方法:
  1、手工洗板方法:将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内,浸泡1-2分钟,吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次,根据需要,重复此过程数次。
  2、自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。本试剂盒可同时检测,且与其它相关蛋白无交叉反应。
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