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细说绵羊ELISA试剂盒的标本要求和操作步骤

发布时间: 2022-07-25  点击次数: 84次
  绵羊ELISA试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗绵羊IgG1抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的绵羊IgG1与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗绵羊IgG1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗绵羊IgG1抗体与结合在包被抗体上的绵羊IgG1结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,绵羊IgG1浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中绵羊IgG1的浓度。
 
  绵羊ELISA试剂盒的标本要求:
  1、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
  2、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
 
  操作步骤:
  1、在各孔中加入标准品或样品各100μL,37℃孵育90分钟;
  2、加入100μL生物素化抗体工作液,37℃孵育60分钟;
  3、洗涤3次;
  4、加入100μL酶结合物工作液,37℃孵育30分钟;
  5、洗涤5次;
  6、加入90μL底物溶液,37℃孵育15分钟左右;
  7、加入50μL终止液,立即在450nm波长处测量OD值;
  8、结果计算。
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