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正确处理样本是保证牛ELISA试剂盒检测数据的主要因素

发布时间: 2022-05-27  点击次数: 45次
  通常我们可用于牛ELISA试剂盒检测的样本是有多种类型的,如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等,不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性,下面简单介绍一下。
 
  1、细胞培养上清:
  取细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
 
  2、细胞裂解液:
  吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略;
  收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次;
  加入适量的预冷PBS或细胞裂解液重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬;
  将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎,以达到裂解的目的。
 
  3、血清:
  血清是常用于牛ELISA试剂盒检测的一类样本,处理也比较简单;
  用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,使血清析出。4℃ 1000×g离心20分钟,仔细收集上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融;
  采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的牛ELISA试剂盒检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
 
  4、血浆:
  用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃,1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本;
  常用的抗凝剂为EDTA、肝素钠和枸橼酸钠等,检测时还应仔细阅读试剂盒说明书,检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求;
  在牛ELISA试剂盒中除了包被外,一般需进行45加样。在定性测定中有时不强调加样量的准确性,例如规定为加样一滴。此时应该使用相同口径的滴管,保持准确的加样姿势,使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中则加样量应力求准确。标本和结合物的稀释液应按规定配制。加样时应将液体加在孔底,避免加在孔壁上部,并注意不可出现气泡。
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